interacțiunile glicoproteinei în plic în asamblarea coronavirusului

coronavirusurile sunt asamblate prin înmugurire în membranele netede ale compartimentului intermediar ER-to-Golgi. Am studiat asocierea glicoproteinelor membranei virale M și S în formarea plicului virion. Folosind analiza coimmunoprecipitației am demonstrat că proteinele m și S ale virusului hepatitei de șoarece (MHV) interacționează în mod specific formând complexe heteromultimerice în celulele infectate., Acestea au putut fi detectate numai atunci când detergenții utilizați pentru solubilizarea lor din celule sau virioni au fost aleși cu atenție: o combinație de detergenți neionici (NP-40) și ionici (acid deoxicolic) s-au dovedit a fi optimi. Experimentele de urmărire a impulsurilor au arătat că proteinele M și S recent făcute au fost implicate în formarea complexă cu cinetică diferită. Întrucât proteina M a apărut în complexe, imediat după sinteza, nou-sintetizate la proteine făcut acest lucru numai după o fază de latență de > 20 min., M nou făcut a fost încorporat în particule de virus mai repede decât S, ceea ce sugerează că se asociază cu moleculele s preexistente. Folosind coexpresia m și S condusă de virusul vaccinia T7, demonstrăm, de asemenea, formarea complexelor m/s în absența altor proteine coronavirale. Puls-chase labelings și coimmunoprecipitation analizele au arătat că M și S, asociat în pre-Golgi membrane pentru că unglycosylated formă de M, a apărut în M/S complexele rapid., Deoarece nu a fost detectată nicio asociere de M și S atunci când exportul de proteine din ER a fost blocat de brefeldin A, complexele stabile apar cel mai probabil în compartimentul intermediar ER-to-Golgi. Analiza gradientului vitezei zaharozei a arătat că complexele M / S sunt eterogene și de ordin superior, sugerând că acestea sunt menținute prin interacțiuni homo – și heterotipice. Complexele M/s colocalizate cu alfa-manozidază II, o proteină Golgi rezidentă. Ei au dobândit modificări oligozaharidice specifice Golgi, dar nu au fost detectate la suprafața celulei., Astfel, proteina S, care în sine a fost transportată în membrana plasmatică, a fost reținută în complexul Golgi prin asocierea sa cu proteina M. Deoarece coronavirusurile se înmulțesc la membranele pre-Golgi, acest rezultat implică faptul că complexele de glicoproteină din plic nu determină locul de înmugurire. Totuși, auto-asociere de MHV plic glicoproteine în ordin superior complexe indică rolul său în procesul de sortare a membranei virale proteine și de conducere în formarea virale lipoproteine cu haina în virus de asamblare.