de-a Patra Generație Enzyme-Linked Immunosorbent Assay pentru Detectarea Simultană a Virusului Imunodeficienței Umane Antigen și Anticorp

DISCUȚII

În acest studiu, performanța DUO Ultra imunologie a fost evaluată cu probe având diverse origini. Excluzând cei 74 de membri ai panourilor de seroconversie, 2.773 de probe reprezentând 126 de probe reactive (prevalența = 6.,8%) și au fost testate 2647 de probe nereactive. DUO Ultra a clasificat corect 2.757 (99.4%) din probe. Deși toate probele reactive 126 au fost clasificate corect ca reactive de DUO Ultra (sensibilitate 100%), probele 16 au fost identificate ca reactive numai de DUO Ultra. Treisprezece dintre aceste probe au fost analizate prin RT-PCR, dar nivelurile de ARN de peste 50 copii / ml nu au putut fi demonstrate. Celelalte trei probe au fost interpretate ca neconcludente pe baza rezultatelor analizei Western blot (nedeterminate), deoarece volumele acestor probe au fost insuficiente pentru testarea ARN., Deoarece starea reală a acestor trei eșantioane nu poate fi determinată, acestea au fost excluse din calculele de specificitate. Prin urmare, sensibilitatea epidemiologică a DUO Ultra a fost de 100% (126 din 126), incluzând o sensibilitate de 100% pentru probele HIV-2, HIV-1 grup M și HIV-1 grup O. Specificitatea DUO Ultra a fost de cel puțin 99,5% (2,647 din 2,660) în general și 99,7% (1,010 din 1,013) la persoanele cu risc scăzut în comparație cu testele autorizate pentru Administrarea Alimentelor și medicamentelor.,în ceea ce privește cele 16 probe discordante, rezultatele analizei Western blot au furnizat puține informații suplimentare spre rezoluție. După cum sa menționat, 11 din cele 16 probe discordante au prezentat reacții aproape exclusiv la componentele de bază (p18, p24 și p55). Reacțiile la aceste componente nu diferențiază infecția precoce de reacțiile nespecifice la persoanele neinfectate (2)., Acest lucru este valabil și pentru cele cinci probe care au produs rezultate negative, deoarece este bine documentat de panourile de seroconversie că rezultatele Western blot pot fi negative în timpul infecției precoce atunci când testele de screening sunt reactive (2). Se presupune că DUO Ultra a produs rezultate fals reactive cel puțin în 13 care au fost testate pentru prezența ARN. Cu toate acestea, infecția timpurie nu poate fi exclusă, deoarece integritatea procesării specimenelor nu a fost sub controlul nostru și este posibil ca EDTA să nu fi fost utilizată pentru a colecta specimenul de sânge așa cum este recomandat pentru analiza PCR., Presupunând că probele au fost prelucrate în mod corespunzător, este probabil ca aceste rezultate să reprezinte rezultate fals pozitive de către DUO Ultra, deoarece ARN nu a fost detectat în probele care ar putea fi testate și nivelurile detectabile de ARN ar fi fost așteptate în timpul infecției precoce. Mai mult, dacă aceste probe ar fi fost de la persoane cu infecție stabilită care urmează terapie antivirală în care nivelurile de ARN ar fi putut fi nedetectabile, profilurile Western blot ar fi trebuit să fie mai avansate., Motivul pentru aceste rezultate probabil fals pozitive este incert, deoarece DUO Ultra încorporează gp36, gp41 și gp160. Nu a existat nici o reactivitate la antigenii plic pe Western blot. De asemenea, trebuie remarcat faptul că rata de fals-pozitivitate a DUO Ultra (0,5%) trebuie comparată cu rata colectivă de fals-pozitivitate atât a testelor de anticorpi de referință, cât și a testelor de antigen. Prin urmare, specificitatea DUO Ultra poate fi considerată echivalentă sau mai bună decât cea a testelor HIV de rutină care detectează anticorpii și antigenul.,

când testul a fost provocat pentru sensibilitatea sa analitică, au fost utilizate un număr mare de panouri de seroconversie și un panou de clade de grup m HIV-1 care aveau antigen detectabil. Aceste panouri au fost bine caracterizate pentru detectarea anticorpului HIV și a antigenului utilizând o varietate de teste disponibile în comerț și sunt utile pentru evaluarea capacității testelor de a detecta infecția timpurie (2). După cum sa menționat, DUO Ultra a produs rezultate echivalente sau mai bune decât cele ale testelor utilizate pentru a caracteriza panourile de seroconversie., În medie, DUO Ultra a detectat infecția cu 12,4 zile mai devreme decât testele de anticorpi Comerciale de referință, de generația a treia. Comparativ cu testele Comerciale de antigen, DUO Ultra a detectat infecția în aceeași zi cu una sau mai multe dintre testele de antigen de referință. În 2 din cele 10 panouri, DUO Ultra a detectat antigenul p24 cu 18 zile (patru sângerări) și 5 zile (o sângerare) mai devreme decât unul sau mai multe teste de antigen de referință., Într-o singură sângerare a 1 din cele 10 panouri de seroconversie a fost DUO Ultra mai puțin sensibil pentru detectarea antigenului (2 zile mai târziu) decât doar unul dintre cele cinci teste de antigen utilizate pentru a caracteriza panoul. În plus, DUO Ultra a corelat exact cu Abbott HIVAG-1 pentru detectarea antigenului în probele de clade din grupul M HIV-1. Această sensibilitate analitică ridicată a detectării de către DUO Ultra este cel mai probabil atribuită combinației unui format de a treia generație (sandwich antigen) pentru detectarea anticorpilor și capacitatea de a detecta simultan antigenul.,din câte știm, în prezent există opt teste Comerciale de a patra generație pentru detectarea atât a anticorpilor, cât și a antigenului. În plus față de DUO Ultra, există Enzymun-Test HIV Combi (Boehringer Mannheim), Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika), AxSYM HIV Ag/AB (Abbott), Enzygnost HIV Integral (Dade Behring Marburg), Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad), și COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics GmbH)., Cea de-a opta testului este de 18 min, dublu-antigen tip sandwich combinație test numit Elecsys HIV Combi (Boehringer Mannheim), care a fost raportat de a avea o specificitate de 99.8%, atunci când a contestat cu o cohortă de pacienți spitalizați (F. Donie, B. Upmeier, E. Hoess, și E. Faatz, Abstr. A 12-A lume SIDA Conf., abținere. 163/41102, 1998). Acest test rapid se bazează pe electrochimie și se raportează că reduce perioada de fereastră cu 5 zile. Un al nouălea test, neidentificat, necomercial, este un test imunoenzimatic lineal evaluat pentru a avea o sensibilitate de numai 99,5% și o specificitate de 94.,8%, iar o evaluare a raportat că timpul necesar pentru diagnosticarea infecției acute a fost redus la aproximativ 2 săptămâni (19).

Aceste teste au demonstrat sensibilitatea variind de la 99.5 la 100%. Mai multe studii cu dimensiuni mari ale eșantioanelor au raportat sensibilități de 98 până la 99.,87% de Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB, Enzymun-Test HIV Combi, AxSYM HIV Ag/AB, iar Enzygnost HIV Integral (14, 23; Brust și Knapp, Abstr. XIII Int. SIDA Conf.; Faatz și colab., Abținere. A 12-A lume SIDA Conf.; și West și colab., Abținere. XIII Int. SIDA Conf.) Folosind panouri de seroconversie, mai multe evaluări au calculat o reducere a ferestrei de diagnostic cu minimum 4 zile, iar unele au raportat chiar o reducere de până la 9 zile prin utilizarea testelor de generația a patra (14, 24, 26)., Specificitățile au variat între 98 și 100%, excluzând un studiu care a raportat o specificitate de numai 88,2% (26). Acest din urmă studiu a testat performanța HIV DUO cu un eșantion de doar 250 de potențial cross-reactive probe, cum ar fi specimene de femei gravide; pacienții cu tulburări autoimune sau factor reumatoid; pacienții reactive pentru IgM anticorpi citomegalovirus, herpes simplex, virusul rubeolei, sau toxoplasmoza; și pacienții infectați cu hepatita C sau virusul Epstein-Barr.,de fapt, toate studiile revizuite care au evaluat sistemul bioMérieux au fost efectuate folosind HIV DUO (15, 18, 26, 27). Trei dintre cele patru studii au raportat sensibilități de 100% la testarea probelor de la persoane cu infecții precoce și stabilite (15, 18, 27). Singurul studiu care a raportat o sensibilitate de 91,4% a utilizat 17 panouri de seroconversie și a evaluat astfel sensibilitatea analitică, nu sensibilitatea epidemiologică (capacitatea de a detecta infecția stabilită) (26). În plus față de studiul menționat mai sus, care a raportat o specificitate de 88.,2%, un alt studiu care utilizează duo HIV a demonstrat o specificitate cuprinsă între 98, 2 și 100% atunci când au fost testate cohorte mici de probe potențial reactive încrucișate (15, 26). Al patrulea studiu a raportat o specificitate de 99,5% într-o evaluare multicentrică foarte mare, utilizând probe de la 29.657 de pacienți (18)., În plus față de detectarea toate 453 HIV-infectate persoane, HIV DUO avut capacitatea de a detecta precoce infecție în 17 probe care conțin antigenul p24 care au fost non-reactive de referință a treia generație de teste și de Western blotting, susținând beneficiile adăugarea antigenului de testare componentă a unui test de screening. Interesant este că doar 11 din cele 17 probe au avut niveluri detectabile de ARN și toate cele 17 au fost rezolvate ca infecții acute după testarea ulterioară (18).,

Comparativ, studiul de față este primul de a evalua cea mai nouă versiune, DUO Ultra, și să utilizeze cea mai mare varietate de probe și eșantioane de populații, inclusiv pacienții internați în spital, ambulator, donatori de sânge, HIV-2 probe, HIV-1 grupa de probe, HIV-1 grupa M clade, pacienții din trei locații geografice, și de seroconversie panouri. Contestată cu 2.647 probe nereactive din mai multe setări și locații geografice, specificitatea a cel puțin 99.,5% ar fi putut fi mai mare, deoarece 8 din cele 13 rezultate presupuse fals pozitive au fost nedeterminate de western blotting, conferind o anumită incertitudine cu privire la adevăratul lor statut. De fapt, specificitatea a fost de 99,7% când au fost analizate 1.010 specimene donatoare de sânge.HIV P24 antigenemia apare devreme după infecție; cu toate acestea, atunci când anticorpii devin detectabili, antigenul nu este de obicei demonstrabil, cel mai probabil din cauza complexelor antigen-anticorp din sânge, necesitând astfel și un test pentru anticorpul HIV (6)., Deși prezența antigenului este foarte specifică pentru infecție, o limitare semnificativă de teste pot fi insensibil niveluri de detecție, pentru concentrații mici de antigen sunt dificil de a detecta și antigenemia apare numai tranzitor în timpul diferitelor stadii de infecție (13). Testul antigen poate fi incapabil să detecteze 75% dintre persoanele cu risc scăzut care sunt infectate, dar sunt seronegative (12).,pentru a asigura în continuare siguranța alimentării cu sânge, testul antigenului p24, pe lângă testele de anticorpi HIV, este utilizat pentru screening-ul sângelui, componentelor sanguine, leucocitelor sursă și plasmei sursă vizate pentru transfuzie în Statele Unite (11). Înainte de 1995, o donare de sânge la fiecare 210.000 până la 1.140.000 în Statele Unite a fost estimată a fi de la o persoană infectată cu HIV în perioada ferestrei, care este de obicei de 22 până la 25 de zile sau mai mult (17)., Prin implementarea screeningului antigen al sângelui, se estimează că patru până la șase cazuri de infecții HIV asociate transfuziei pot fi prevenite pe an, scăzând riscul estimat pe unitate transfuzat la un interval de la unul din 562 000 la unul din 825 000 (9, 17). Prin urmare, se pare că testarea antigenului are utilitate pentru a ajuta la protejarea alimentării cu sânge, deși la un cost care depășește 60 de milioane de dolari anual. Datorită capacității lor de a detecta antigenul p24, DUO Ultra și alte ELISAs de a patra generație vor avea valoare în detectarea infecției precoce.,pe baza capacității sale și a configurației DUO Ultra, testul este foarte aplicabil pentru diagnosticarea infecției HIV precoce și stabilită de către laboratoarele clinice spitalicești și private și alte setări de laborator. În aceste situații, persoanele care urmează să fie examinate pentru infecție provin din grupuri cu risc mai mare decât populația donatoare de sânge și, prin urmare, necesită utilizarea unor metode de testare cu niveluri ridicate de sensibilitate analitică pentru infecția primară., De importanță, nivelul ridicat de sensibilitate analitică și epidemiologică demonstrat de DUO Ultra cu seroconversie și panouri clade, precum și cu o varietate de populații de pacienți îl face ideal pentru utilizarea într-o varietate de situații de testare pentru diagnosticarea infecției precoce și stabilite.unsprezece probe infectate cu HIV au fost identificate de DUO Ultra prin detectarea antigenului., În setările de laborator de rutină, acești indivizi nu ar fi fost identificați prin testele obișnuite de anticorpi de screening, deoarece testarea antigenului la pacienți nu este efectuată în mod obișnuit ca instrument de screening în afara băncilor de sânge (6). Detectarea infecției precoce s-a dovedit a fi benefică pentru inițierea promptă a terapiei antiretrovirale adecvate într-un interval de timp relevant din punct de vedere clinic. În plus, detectarea precoce va ajuta la implementarea în timp util a intervențiilor, cum ar fi consilierea pacienților, prevenirea transmiterii și gestionarea infecției.,prin testarea simultană a prezenței antigenului și anticorpului HIV, DUO Ultra nu numai că va oferi o inițiere și o eficiență crescută a tratamentului și o reducere a riscului de transmitere, dar oferă mai multe avantaje față de testarea convențională a anticorpilor și antigenului. Aceasta reduce timpul necesar pentru a efectua atât testarea anticorpilor, cât și a antigenului cu cel puțin 50%, deoarece DUO Ultra va finaliza ambele teste simultan într-o perioadă comparabilă cu cea necesară pentru realizarea independentă a unuia dintre teste. DUO Ultra este un sistem eficient, automatizat; adică.,, după introducerea serului sau a plasmei în sonda de probă a benzii de reactiv și introducerea identificării în programul de calculator, instrumentul va funcționa independent pentru a finaliza testarea A până la 30 de probe în 2,5 ore în absența timpului sau supravegherii ulterioare. Astfel, timpul hands-on pentru tehnician este de aproximativ 20 până la 30 de minute pe 30 de teste pentru a detecta atât antigenul, cât și anticorpul., În al treilea rând, oferă flexibilitate deoarece orice număr de probe (de la 1 la 28 cu două comenzi) pot fi testate fără risipa de reactivi sau puțuri de bandă și deoarece probele pot fi testate peste noapte fără monitorizare. Trei seturi de alergări pot fi efectuate cu ușurință pe zi, fiecare constând din 30 de probe pentru un total de 90 de probe pe zi. Deși producătorul nu a citat un preț, este rezonabil să presupunem că prețul DUO Ultra va fi competitiv cu prețul colectiv al testelor de anticorpi și antigeni.,testele HIV au evoluat în ultimul deceniu pentru a produce teste care posedă caracteristici noi și care pot aborda acele probleme de diagnostic care rămân, de exemplu, detectarea infecției precoce, rezultate nedeterminate, infecția la nou-născut, nevoia de rezultate rapide etc. Disponibilitatea unui test de a patra generație capabil să ofere o creștere a sensibilității față de alte teste de anticorpi este încă un pas evolutiv., Conceptul de detectare simultană a antigenului și anticorpilor este de o importanță deosebită, deoarece există o nevoie clară de a continua testarea pentru infecția timpurie și de a aplica strategii de economisire a costurilor. Acest studiu, împreună cu studiile altora, a verificat că acest tip de strategie de testare este exactă și eficientă și oferă o serie de avantaje față de generațiile anterioare de anticorpi și antigen elisas.