DISCUSSÃO
neste estudo, o desempenho do DUO Ultra imunoensaio foi avaliado com amostras ter diversas origens. Excluindo os 74 membros dos painéis de seroconversão, 2,773 amostras representam 126 amostras reactivas (prevalência = 6.,8%) e 2.647 amostras não reativas foram testadas. O DUO Ultra classificou correctamente 2,757 (99,4%) das amostras. Apesar de todas as 126 amostras reativas terem sido corretamente classificadas como reativas pelo DUO Ultra (100% de sensibilidade), 16 amostras foram identificadas como reativas apenas pelo DUO Ultra. Treze destas amostras foram analisadas por RT-PCR, mas não foi possível demonstrar níveis de ARN acima de 50 cópias/ml. As três amostras restantes foram interpretadas como inconclusivas com base nos resultados da análise Western blot (indeterminate), uma vez que os volumes destas amostras eram insuficientes para testes de RNA., Uma vez que não é possível determinar o verdadeiro estatuto destas três amostras, estas foram excluídas dos cálculos da especificidade. Por conseguinte, a sensibilidade epidemiológica da dupla Ultra foi de 100% (126 de 126), incluindo uma sensibilidade de 100% para as amostras do VIH-2, do grupo m do VIH-1 e do grupo O do VIH-1. A especificidade do DUO Ultra foi de pelo menos 99,5% (2.647 de 2.660) em geral e 99,7% (1.010 de 1.013) em indivíduos de baixo risco quando comparados com testes licenciados para administração de alimentos e medicamentos.,
no que diz respeito às 16 amostras discordantes, os resultados da análise Western blot forneceram pouca informação adicional para a resolução. Como observado, 11 das 16 amostras discordantes exibiram reações quase exclusivamente aos componentes principais (p18, p24 e p55). As reacções a estes componentes não diferenciam a infecção precoce de reacções não específicas em indivíduos não infectados (2)., Isto também é verdade para as cinco amostras que produziram resultados negativos, uma vez que está bem documentado por painéis de seroconversão que os resultados de Western blot podem ser negativos durante a infecção precoce quando os testes de rastreio são reativos (2). Presume-se que o DUO Ultra produziu resultados falsos reativos pelo menos nos 13 que foram testados para a presença de RNA. No entanto, a infecção precoce não pode ser descartada, uma vez que a integridade do processamento de amostras não estava sob nosso controle e EDTA pode não ter sido usado para coletar a amostra de sangue, como recomendado para a análise PCR., Assumindo que as amostras foram processadas adequadamente, é provável que estes resultados representem resultados falsos positivos pelo DUO Ultra, uma vez que o ARN não foi detectado nas amostras que podiam ser testadas e que se esperariam níveis detectáveis de ARN durante a infecção precoce. Além disso, se estas amostras tivessem sido de pessoas com infecção estabelecida submetidas a terapêutica antiviral em que os níveis de ARN possam ter sido indetectáveis, os perfis de Western blot deveriam ter sido mais avançados., A razão para estes resultados presumivelmente falsos positivos é incerta, uma vez que o DUO Ultra incorpora gp36, gp41, e gp160. Não houve qualquer reactividade aos antigénios do envelope no Western blot. Deve também notar-se que a taxa de falsa positividade do DUO Ultra (0, 5%) deve ser comparada com a taxa de falsa positividade colectiva dos testes de anticorpos e antigénios de referência. Por conseguinte, a especificidade do DUO Ultra pode ser considerada equivalente ou superior à dos testes de rotina do VIH que detectam anticorpos e antigénios.,quando o ensaio foi questionado quanto à sua sensibilidade analítica, foi utilizado um grande número de painéis de seroconversão e um painel de clados do grupo m do VIH-1 com antigénios detectáveis. Estes painéis têm sido bem caracterizados para a detecção de anticorpos e antigénios do HIV usando uma variedade de testes comercialmente disponíveis e são úteis para avaliar a capacidade dos testes para detectar infecções precoces (2). Como observado, o DUO Ultra produziu resultados equivalentes ou melhores do que os dos testes que foram utilizados para caracterizar os painéis de seroconversão., Em média, o DUO Ultra detectou infecção 12, 4 dias antes dos testes de anticorpos comerciais de referência da terceira geração. Em comparação com os testes comerciais de antigénios, o DUO Ultra detectou uma infecção no mesmo dia que um ou mais dos testes de antigénios de referência. Em 2 dos 10 painéis, o DUO Ultra detectou antigénio p24 18 dias (quatro hemorragias) e 5 dias (uma hemorragia) antes de um ou mais dos testes de antigénio de referência., Em apenas uma hemorragia de 1 dos 10 painéis de seroconversão foi o DUO Ultra menos sensível para detecção de antigénios (2 dias depois) do que apenas um dos cinco ensaios de antigénios utilizados para caracterizar o painel. Além disso, o DUO Ultra correlacionou-se exactamente com o Abbott HIVAG-1 para a detecção de antigénios nas amostras de clados do grupo m do VIH-1. Esta elevada sensibilidade analítica da detecção pelo DUO Ultra é provavelmente atribuída à combinação de um formato de terceira geração (sanduíche antigénio) para a detecção de anticorpos e à capacidade de detectar simultaneamente antigénios.,tanto quanto sabemos, existem actualmente oito ensaios comerciais de quarta geração para detecção de anticorpos e antigénios. Além do DUO Ultra, há a Enzymun-Teste HIV Combi (Boehringer Mannheim), Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika), AxSYM HIV Ag/AB (Abbott), Enzygnost HIV Integral (Dade Behring Marburg), Genescreen e a infecção pelo HIV Ag-AB (Bio-Rad), e COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics GmbH)., O oitavo ensaio é de 18 min, duas vezes antigen sanduíche combinação de ensaio chamado o Elecsys HIV Combi (Boehringer Mannheim), que tem sido relatado para ter uma especificidade de 99,8% de quando desafiados com uma coorte de pacientes hospitalizados (F. Donie, B. Upmeier, E. Hoess, e E. Faatz, Abstr. 12th World AIDS Conf., abstr. 163/41102, 1998). Este ensaio rápido é baseado na electrochemiluminescência e é relatado para reduzir o período de janela em 5 dias. Um nono ensaio não-identificado e não-comercial é um ensaio imunoenzimático lineal avaliado como tendo uma sensibilidade de apenas 99, 5% e uma especificidade de 94.,8%, e uma avaliação relatou que o tempo necessário para diagnosticar a infecção aguda foi encurtado para aproximadamente 2 semanas (19).
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na verdade, todos os estudos revistos que avaliaram o sistema bioMérieux foram realizados usando o DUO HIV(15, 18, 26, 27). Três dos quatro estudos relataram sensibilidades de 100% ao testar amostras de indivíduos com infecções precoces e estabelecidas (15, 18, 27). O único estudo que reportou uma sensibilidade de 91,4% utilizou 17 painéis de seroconversão e assim avaliou a sensibilidade analítica e não a sensibilidade epidemiológica (capacidade de detectar infecções estabelecidas) (26). Para além do estudo acima referido, que referiu uma especificidade de 88.,2%, Outro estudo usando o DUO HIV demonstrou uma especificidade que varia de 98,2 a 100% quando pequenas coortes de amostras potencialmente reativas cruzadas foram testadas (15, 26). O quarto estudo relatou uma especificidade de 99,5% em uma avaliação multicêntrica muito grande usando amostras de 29.657 pacientes (18)., Além de detectar todos os 453 indivíduos infectados pelo VIH, o DUO VIH teve a capacidade de detectar a infecção precoce em 17 amostras contendo antigénio p24 que não eram reactivos pelos testes de referência da terceira geração e pela Western blotting, apoiando ainda mais os benefícios da adição do componente de teste do antigénio a um teste de rastreio. Curiosamente, apenas 11 das 17 amostras tinham níveis detectáveis de ARN, e todos os 17 resolveram-se como infecções agudas após testes de acompanhamento (18).,
Comparativamente, o presente estudo é o primeiro a avaliar a nova versão, o DUO Ultra, e utilizar a maior variedade de amostras e amostras de populações, incluindo os pacientes hospitalizados, ambulatoriais, doadores de sangue, HIV-2 em amostras de HIV-1 grupo O de amostras de HIV-1 grupo M subtipos, os pacientes de três localizações geográficas, e painéis de soroconversão. Contestado com 2.647 amostras não reativas de várias configurações e localizações geográficas, a especificidade de pelo menos 99.,5% poderiam ter sido mais elevados, uma vez que 8 dos 13 resultados presumivelmente falsos positivos eram indeterminados pelo Western blotting, transmitindo alguma incerteza quanto ao seu verdadeiro status. Na verdade, a especificidade foi de 99,7% quando 1.010 amostras de doadores de sangue foram analisadas.a antigenemia P24 do VIH ocorre logo após a infecção; no entanto, quando os anticorpos se tornam detectáveis, o antigénio não é geralmente demonstrável, muito provavelmente devido a complexos de antigénios no sangue, necessitando assim de um teste para anticorpos do VIH também (6)., Embora a presença de antigénios seja altamente específica para a infecção, uma limitação significativa dos testes pode ser níveis insensíveis de detecção, porque as baixas concentrações de antigénios são difíceis de detectar e a antigenemia ocorre apenas transitoriamente durante diferentes fases da infecção (13). O teste do antigénio pode ser incapaz de detectar 75% dos indivíduos de baixo risco infectados, mas seronegativos (12).,
A fim de assegurar ainda mais a segurança do fornecimento de sangue, o teste do antigénio p24, para além dos testes de anticorpos do VIH, é utilizado para o rastreio do sangue, dos componentes sanguíneos, dos leucócitos de origem e do plasma de origem destinado a transfusão nos Estados Unidos (11). Antes de 1995, uma doação de sangue em cada 210,000 a 1,140,000 nos Estados Unidos foi estimada para ser de um indivíduo infectado pelo HIV durante o período da janela, que é geralmente de 22 a 25 dias ou mais (17)., Ao implementar o rastreio antigénio do sangue, pode ser prevenido um número estimado de quatro a seis casos de infecções por VIH associadas à transfusão por ano, reduzindo o risco estimado por unidade transfundida para um intervalo de um em 562 000 a um em 825 000 (9, 17). Portanto, parece que o teste de antigénios tem utilidade para ajudar a proteger o fornecimento de sangue, embora a um custo superior a 60 milhões de dólares por ano. Devido à sua capacidade de detectar o antigénio p24, o DUO Ultra e outros ELISAs de quarta geração serão de valor na detecção de infecções precoces.,com base na sua capacidade e configuração do DUO Ultra, o ensaio é altamente aplicável para o diagnóstico de infecção precoce e estabelecida pelo VIH por laboratórios hospitalares e privados e outros parâmetros laboratoriais. Nestes contextos, os indivíduos a serem rastreados para a infecção vêm de grupos de maior risco do que a população do doador de sangue e, portanto, exigem o uso de métodos de teste com altos níveis de sensibilidade analítica para a infecção primária., De importância, o alto nível de sensibilidade analítica e epidemiológica demonstrado pelo DUO Ultra com painéis de seroconversão e clado, bem como com uma variedade de populações de pacientes, o torna ideal para uso em uma variedade de situações de teste para o diagnóstico de infecção precoce e estabelecida.
11 amostras infectadas pelo VIH foram identificadas pela DUO Ultra via detecção de antigénios., Em cenários laboratoriais de rotina, estes indivíduos não teriam sido identificados pelos testes habituais de rastreio de anticorpos, uma vez que os testes de antigénios dos doentes não são normalmente realizados como uma ferramenta de rastreio fora dos bancos de sangue (6). A detecção de uma infecção precoce demonstrou ser benéfica para o início imediato de terapêutica anti-retroviral apropriada num período de tempo clinicamente relevante. Além disso, a detecção precoce ajudará na implementação atempada de intervenções, tais como aconselhamento de pacientes, prevenção de transmissão e gestão de infecções.,através da análise simultânea da presença de antigénios e anticorpos do VIH, o DUO Ultra não só proporcionará um aumento da iniciação e eficiência do tratamento e uma redução do risco de transmissão, como oferece várias vantagens em relação aos testes convencionais de anticorpos e antigénios. Diminui o tempo necessário para realizar testes de anticorpos e antigénios em pelo menos 50%, uma vez que o DUO Ultra irá completar ambos os testes simultaneamente num período comparável ao necessário para realizar um dos testes de forma independente. O DUO Ultra é um sistema eficiente e automatizado.,, depois de introduzir soro ou plasma na amostra bem da tira de reagente e de introduzir identificação no programa de computador, o instrumento funcionará de forma independente para completar o teste de até 30 amostras em 2,5 h, na ausência de mais tempo prático ou supervisão. Assim, o tempo disponível para o técnico é de aproximadamente 20 a 30 minutos por 30 testes para detectar o antigénio e o anticorpo., Em terceiro lugar, oferece flexibilidade porque qualquer número de amostras (1 a 28 com dois controlos) pode ser testado sem o desperdício de reagentes ou poços de tiras e porque as amostras podem ser testadas de um dia para o outro sem monitorização. Podem realizar-se facilmente três conjuntos de ensaios por dia, cada um composto por 30 amostras num total de 90 amostras por dia. Embora o fabricante não tenha citado um preço, é razoável supor que o preço da DUO Ultra será competitivo com o preço coletivo de testes de anticorpos e antigénios.,os testes de HIV evoluíram ao longo da última década para produzir testes que possuem características novas e que podem abordar os problemas diagnósticos que permanecem, por exemplo, detecção de infecção precoce, resultados indeterminados, infecção no recém-nascido, a necessidade de resultados rápidos, etc. A disponibilidade de um teste de quarta geração capaz de oferecer um aumento de sensibilidade em relação a outros testes de anticorpos é mais um passo evolutivo., O conceito de detecção simultânea de antigénios e anticorpos é de grande importância, uma vez que há uma necessidade definitiva de continuar a testar a infecção precoce e de aplicar estratégias de economia de custos. Este estudo, juntamente com os estudos de outros, verificou que este tipo de estratégia de teste é preciso e eficaz e oferece uma série de vantagens sobre gerações anteriores de anticorpos e antigénios ELISAs.
