as interacções com a glicoproteína-Envelope na montagem de coronavirus

Coronavirus são montadas por brotação em membranas lisas do compartimento intermédio ER-to-Golgi. Estudámos a Associação das glicoproteínas da membrana viral M E S na formação do envelope do virião. Utilizando a análise de coimmunoprecipitação, demonstrámos que as proteínas m E S do vírus da hepatite do rato (MHV) interagem especificamente formando complexos heteromultiméricos em células infectadas., Estes só puderam ser detectados quando os detergentes utilizados para a sua solubilização a partir de células ou viriões foram cuidadosamente escolhidos: uma combinação de detergentes não iónicos (NP-40) e iónicos (ácido desoxicólico) revelou-se óptima. Experimentos de perseguição de pulso revelaram que as proteínas m E S recém-feitas engajaram-se em formação complexa com cinética diferente. Enquanto a proteína M apareceu em complexos imediatamente após a sua síntese, a proteína S recentemente sintetizada só o fez após uma fase de lag de > 20 min., Recentemente feito M foi incorporado em partículas virais mais rápido do que S, O que sugere que ele se associa com moléculas S pré-existentes. Usando a co-expressão de M E S do vírus vaccinia, também demonstramos a formação de complexos M/S na ausência de outras proteínas coronavíricas. Análises de perseguição de pulso e coimmunoprecipitação revelaram que M E S se associam em membranas pré-Golgi porque a forma não-glicosilada de M apareceu rapidamente em complexos M/S., Uma vez que não foi detectada qualquer associação de M E S quando a exportação de proteínas do ER foi bloqueada por befeldin a, é provável que surjam complexos estáveis no compartimento intermédio ER-to-Golgi. A análise do gradiente de velocidade da sacarose mostrou que os complexos M / S são heterogêneos e de ordem superior, sugerindo que eles são mantidos por interações homo – e heterotípicas. Complexos M / S colocalizados com alfa-manosidase II, uma proteína Golgi residente. Eles adquiriram modificações de oligossacarídeos específicos de Golgi, mas não foram detectados na superfície celular., Assim, a proteína S, que por si só foi transportada para a membrana plasmática, foi mantida no complexo de Golgi pela sua associação com a proteína M. Como os Coronavirus brotam nas membranas pré-Golgi, este resultado implica que os complexos da glicoproteína envolvente não determinam o local de brotação. No entanto, a auto-Associação das glicoproteínas do envelope MHV em complexos de ordem superior é indicativa do seu papel na triagem das proteínas da membrana viral e na condução da formação do revestimento lipoproteico viral na montagem do vírus.