interactions des glycoprotéines D’enveloppe dans l’assemblage de coronavirus

Les coronavirus sont assemblés par bourgeonnement dans des membranes lisses du compartiment intermédiaire ER-to-Golgi. Nous avons étudié l’association des glycoprotéines membranaires virales M et S dans la formation de l’enveloppe du virion. En utilisant l’analyse de coimmunoprécipitation, nous avons démontré que les protéines M et s du virus de l’hépatite de souris (MHV) interagissent spécifiquement en formant des complexes hétéromultimériques dans les cellules infectées., Ceux-ci n’ont pu être détectés que lorsque les détergents utilisés pour leur solubilisation à partir de cellules ou de virions ont été soigneusement choisis: une combinaison de détergents non ioniques (NP-40) et ioniques (acide désoxycholique) s’est avérée optimale. Les expériences de Pulse-chase ont révélé que les protéines M et S nouvellement fabriquées s’engageaient dans une formation complexe avec une cinétique différente. Alors que la protéine M est apparue dans les complexes immédiatement après sa synthèse, la protéine S nouvellement synthétisée ne l’a fait qu’après une phase de retard de > 20 min., M nouvellement fabriqué a été incorporé dans des particules virales plus rapidement que S, ce qui suggère qu’il s’associe à des molécules s préexistantes. En utilisant la coexpression de M et S par le virus de la vaccine T7, nous démontrons également la formation de complexes M/s en l’absence d’autres protéines coronavirales. Les étiquetages Pulse-chase et les analyses de coimmunoprécipitation ont révélé que M et S s’associent dans les membranes pré-Golgi parce que la forme non glycosylée de M apparaît rapidement dans les complexes M/s., Comme aucune association entre M et S n’a été détectée lorsque l’exportation de protéines de L’ER a été bloquée par la bréfeldine A, il est fort probable que des complexes stables apparaissent dans le compartiment intermédiaire ER-Golgi. L’analyse du gradient de vitesse du saccharose a montré que les complexes M / s étaient hétérogènes et d’ordre supérieur, ce qui suggère qu’ils sont maintenus par des interactions homo – et hétérotypiques. Complexes m / S colocalisés avec l’alpha-mannosidase II, une protéine de Golgi résidente. Ils ont acquis des modifications oligosaccharidiques spécifiques à Golgi, mais n’ont pas été détectés à la surface de la cellule., Ainsi, la protéine S, qui sur elle-même a été transportée vers la membrane plasmique, a été retenue dans le complexe de Golgi par son association avec la protéine M. Étant donné que les coronavirus bourgeonnent au niveau des membranes pré-Golgi, ce résultat implique que les complexes de glycoprotéines de l’enveloppe ne déterminent pas le site de bourgeonnement. Pourtant, l’auto-association des glycoprotéines de L’enveloppe MHV en complexes d’ordre supérieur est révélatrice de son rôle dans le tri des protéines membranaires virales et dans la formation de la couche de lipoprotéines virales dans l’assemblage Viral.