analyse immuno-enzymatique de quatrième génération pour la détection simultanée d’antigène et d’anticorps du Virus de l’Immunodéficience Humaine

DISCUSSION

dans cette étude, la performance du DUO Ultra immunoessay a été évaluée avec des échantillons d’origines diverses. En excluant les 74 membres des panels de séroconversion, 2 773 échantillons représentant 126 échantillons réactifs (prévalence = 6.,8%) et 2 647 échantillons non réactifs ont été testés. Le DUO Ultra a correctement classé 2 757 (99,4%) des échantillons. Bien que les 126 échantillons réactifs aient été correctement classés comme réactifs par le DUO Ultra (sensibilité à 100%), 16 échantillons n’ont été identifiés comme réactifs que par le DUO Ultra. Treize de ces échantillons ont été analysés par RT-PCR, mais les niveaux d’ARN supérieurs à 50 copies/ml n’ont pas pu être démontrés. Les trois échantillons restants ont été interprétés comme non concluants d’après les résultats de L’analyse Western blot (indéterminé), puisque les volumes de ces échantillons étaient insuffisants pour les tests D’ARN., Étant donné que le statut réel de ces trois échantillons ne peut pas être déterminé, ils ont été exclus des calculs de spécificité. Par conséquent, la sensibilité épidémiologique du DUO Ultra était de 100% (126 sur 126), y compris une sensibilité de 100% pour les échantillons du VIH-2, des clades du groupe m du VIH-1 et du groupe O du VIH-1. La spécificité du DUO Ultra était d’au moins 99,5% (2 647 sur 2 660) dans l’ensemble et de 99,7% (1 010 sur 1 013) chez les personnes à faible risque par rapport aux tests homologués par la Food and Drug Administration.,

en ce qui concerne les 16 échantillons discordants, les résultats de L’analyse Western blot ont fourni peu d’informations supplémentaires sur la résolution. Comme indiqué, 11 des 16 échantillons discordants présentaient des réactions presque exclusivement aux composants centraux (p18, p24 et p55). Les réactions à ces composants ne différencient pas l’infection précoce des réactions non spécifiques chez les personnes non infectées (2)., Cela est également vrai pour les cinq échantillons qui ont produit des résultats négatifs, car il est bien documenté par les panels de séroconversion que les résultats du Western blot peuvent être négatifs lors d’une infection précoce lorsque les tests de dépistage sont réactifs (2). On suppose que le DUO Ultra a produit des résultats faussement réactifs au moins dans les 13 qui ont été testés pour la présence d’ARN. Cependant, une infection précoce ne peut être exclue car l’intégrité du traitement des échantillons n’était pas sous notre contrôle et L’EDTA n’a peut-être pas été utilisée pour collecter l’échantillon de sang tel que recommandé pour l’analyse par PCR., En supposant que les échantillons ont été traités de manière appropriée, il est probable que ces résultats représentent des résultats faussement positifs par le DUO Ultra, car L’ARN n’a pas été détecté dans les échantillons qui pourraient être testés et des niveaux d’ARN détectables auraient été attendus lors d’une infection précoce. De plus, si ces échantillons avaient été prélevés chez des personnes ayant une infection établie sous traitement antiviral où les niveaux D’ARN pouvaient être indétectables, les profils Western blot auraient dû être plus avancés., La raison de ces résultats vraisemblablement faussement positifs est incertaine puisque le DUO Ultra intègre gp36, gp41 et gp160. Il n’y avait aucune réactivité aux antigènes d’enveloppe sur le western blot. Il convient également de noter que le taux de fausse positivité du DUO Ultra (0,5%) doit être comparé au taux de fausse positivité collective des tests d’anticorps et d’antigène de référence. Par conséquent, la spécificité du DUO Ultra peut être considérée comme équivalente ou meilleure que celle des tests de routine sur le VIH qui détectent les anticorps et l’antigène.,

lorsque le test a été contesté pour sa sensibilité analytique, un grand nombre de panels de séroconversion et un panel de clades du groupe m du VIH-1 ayant un antigène détectable ont été utilisés. Ces panneaux ont été bien caractérisés pour la détection d’anticorps et d’antigène du VIH à l’aide d’une variété de tests disponibles dans le commerce et sont utiles pour évaluer la capacité des tests à détecter une infection précoce (2). Comme indiqué, le DUO Ultra a produit des résultats équivalents ou meilleurs que ceux des tests utilisés pour caractériser les panels de séroconversion., En moyenne, le DUO Ultra a détecté l’infection 12,4 jours plus tôt que les tests d’anticorps commerciaux de troisième génération de référence. Par rapport aux tests d’antigène commerciaux, le DUO Ultra a détecté une infection le même jour qu’un ou plusieurs des tests d’antigène de référence. Dans 2 des 10 panneaux, le DUO Ultra a détecté l’antigène p24 18 jours (quatre saignements) et 5 jours (un saignement) plus tôt qu’un ou plusieurs des tests d’antigène de référence., Dans un seul saignement de 1 des 10 panneaux de séroconversion, le DUO Ultra était moins sensible à la détection de l’antigène (2 jours plus tard) qu’un seul des cinq tests d’antigène utilisés pour caractériser le panneau. De plus, le DUO Ultra est en corrélation exacte avec le HIVAG-1 Abbott pour la détection de l’antigène dans les échantillons du clade m du groupe VIH-1. Cette sensibilité analytique élevée de détection par le DUO Ultra est très probablement attribuée à la combinaison d’un format de troisième génération (sandwich antigène) pour la détection d’anticorps et à la capacité de détecter simultanément l’antigène.,

à notre connaissance, il existe actuellement huit essais commerciaux de quatrième génération pour la détection des anticorps et des antigènes. En plus du DUO Ultra, Il existe le Combi Enzymun-Test HIV (Boehringer Mannheim), Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika), AxSYM HIV Ag/AB (Abbott), Enzygnost HIV Integral (Dade Behring Marburg), Genescreen plus HIV Ag-AB (Bio-Rad) et COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics GmbH)., Le huitième essai est un essai de combinaison double-antigène de 18 minutes appelé Elecsys HIV Combi (Boehringer Mannheim) qui a été signalé pour avoir une spécificité de 99,8% lorsqu’il est contesté avec une cohorte de patients hospitalisés (F. Donie, B. Upmeier, E. Hoess et E. Faatz, Abstr. 12ème Conférence mondiale sur le SIDA Conf., abstr. 163/41102, 1998). Ce test rapide est basé sur l’électrochimiluminescence et réduit la période de fenêtre de 5 jours. Un neuvième essai non commercial, non identifié, est un essai immunoenzymatique linéaire évalué pour avoir une sensibilité de seulement 99,5% et une spécificité de 94.,8%, et une évaluation a rapporté que le temps nécessaire pour diagnostiquer l’infection aiguë a été raccourci à environ 2 semaines (19).

Ces tests ont montré des sensibilités allant de 99.5 à 100%. Plusieurs études avec de grands échantillons ont rapporté des sensibilités de 98 à 99.,87% par le Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB, L’Enzymun-Test HIV Combi, AxSYM HIV Ag/AB et L’Enzygnost HIV Integral (14, 23; Brust et Knapp, Abstr. XIII Int. AIDS Conf.; Faatz et coll., Abstr. 12ème Conférence mondiale sur le SIDA Conf.; et West et coll., Abstr. XIII Int. AIDS Conf.) En utilisant des panels de séroconversion, plusieurs évaluations ont calculé une réduction de la fenêtre de diagnostic d’un minimum de 4 jours et certaines ont même rapporté une réduction allant jusqu’à 9 jours en utilisant les tests de quatrième génération (14, 24, 26)., Les spécificités ont varié de 98 à 100%, à l’exception d’une étude qui a rapporté une spécificité de seulement 88,2% (26). Cette dernière étude a testé la performance du duo VIH avec un échantillon de seulement 250 échantillons potentiellement réactifs croisés, tels que des échantillons de femmes enceintes; des patients atteints de troubles auto-immunes ou de facteur rhumatoïde; des patients réactifs pour les anticorps IgM contre le cytomégalovirus, le virus de l’herpès simplex, le virus de la rubéole ou la toxoplasmose; ,

en fait, toutes les études examinées qui ont évalué le système bioMérieux ont été réalisées en utilisant le duo VIH (15, 18, 26, 27). Trois des quatre études ont rapporté des sensibilités de 100% lors du test d’échantillons de personnes ayant des infections précoces et établies (15, 18, 27). La seule étude signalant une sensibilité de 91,4% a utilisé 17 panels de séroconversion et a donc évalué la sensibilité analytique, et non la sensibilité épidémiologique (capacité à détecter une infection établie) (26). En plus de l’étude notée ci-dessus qui a rapporté une spécificité de 88.,2%, une autre étude utilisant le duo VIH a démontré une spécificité allant de 98,2 à 100% lorsque de petites cohortes d’échantillons potentiellement réactifs Croisés ont été testées (15, 26). La quatrième étude a rapporté une spécificité de 99,5% dans une très grande évaluation multicentrique utilisant des échantillons de 29 657 patients (18)., En plus de détecter les 453 personnes infectées par le VIH, Le duo VIH avait la capacité de détecter une infection précoce dans 17 échantillons contenant de l’antigène p24 qui n’étaient pas réactifs par les tests de référence de troisième génération et par Western blotting, ce qui appuyait davantage les avantages de l’ajout de la composante test d’antigène à un test de dépistage. Fait intéressant, seulement 11 des 17 échantillons présentaient des niveaux détectables d’ARN, et les 17 se sont tous résolus en infections aiguës lors des tests de suivi (18).,

comparativement, la présente étude est la première à évaluer la nouvelle version, le DUO Ultra, et à utiliser la plus grande variété d’échantillons et de populations d’échantillons, y compris les patients hospitalisés, les patients externes, les donneurs de sang, les échantillons VIH-2, Les échantillons VIH-1 du groupe O, les clades VIH-1 du groupe M, les patients Contesté avec 2 647 échantillons non réactifs provenant de plusieurs milieux et lieux géographiques, la spécificité d’au moins 99.,5% aurait pu être plus élevé, puisque 8 des 13 résultats vraisemblablement faussement positifs étaient indéterminés par Western bloting, ce qui donnait une certaine incertitude quant à leur véritable statut. En fait, la spécificité était de 99,7% lorsque 1 010 échantillons de donneurs de sang ont été analysés.

L’antigénémie du VIH p24 survient tôt après l’infection; cependant, lorsque les anticorps deviennent détectables, l’antigène n’est généralement pas démontrable, probablement en raison de complexes antigène-anticorps dans le sang, ce qui nécessite également un test pour l’anticorps du VIH (6)., Bien que la présence d’antigène soit très spécifique pour l’infection, une limitation significative des tests peut être des niveaux de détection insensibles, car de faibles concentrations d’antigène sont difficiles à détecter et l’antigénémie ne se produit que de manière transitoire pendant les différents stades de l’infection (13). Le test antigénique peut être incapable de détecter 75% des personnes à faible risque infectées mais séronégatives (12).,

afin d’assurer davantage la sécurité de l’approvisionnement en sang, le test d’antigène p24, en plus des tests d’anticorps anti-VIH, est utilisé pour dépister le sang, les composants sanguins, les leucocytes sources et le plasma source ciblés pour la transfusion aux États-Unis (11). Avant 1995, on estimait qu’un don de sang sur 210 000 à 1 140 000 aux États-Unis provenait d’une personne infectée par le VIH pendant la période de la fenêtre, qui est généralement de 22 à 25 jours ou plus (17)., En mettant en œuvre Le dépistage antigénique du sang, on estime que quatre à six cas d’infections à VIH associées à une transfusion peuvent être évités par année, ce qui réduit le risque estimé par unité transfusée à une fourchette de un sur 562 000 à un sur 825 000 (9, 17). Par conséquent, il semble que les tests antigéniques ont une utilité pour aider à protéger l’approvisionnement en sang, mais à un coût dépassant 60 millions de dollars par an. En raison de leur capacité à détecter l’antigène p24, le DUO Ultra et d’autres Elisa de quatrième génération seront utiles pour détecter une infection précoce.,

sur la base de son débit et de la configuration du DUO Ultra, le test est hautement applicable pour le diagnostic d’une infection précoce et établie par le VIH par des laboratoires cliniques hospitaliers et privés et d’autres environnements de laboratoire. Dans ces milieux, les personnes devant être dépistées pour l’infection proviennent de groupes à risque plus élevé que la population de donneurs de sang et nécessitent donc l’utilisation de méthodes de test avec des niveaux élevés de sensibilité analytique pour l’infection primaire., Le haut niveau de sensibilité analytique et épidémiologique démontré par le DUO Ultra avec les panneaux de séroconversion et de clade ainsi qu’avec une variété de populations de patients le rend idéal pour une utilisation dans une variété de situations de test pour le diagnostic d’infection précoce et établie.

onze échantillons infectés par le VIH ont été identifiés par le DUO Ultra grâce à la détection d’antigènes., En laboratoire de routine, ces personnes n’auraient pas été identifiées par les tests d’anticorps de dépistage habituels, puisque les tests antigéniques des patients ne sont pas couramment effectués comme outil de dépistage en dehors des banques de sang (6). La détection d’une infection précoce s’est avérée bénéfique pour l’initiation rapide d’un traitement antirétroviral approprié dans un délai cliniquement pertinent. En outre, la détection précoce aidera à la mise en œuvre en temps opportun des interventions, telles que le Conseil des patients, la prévention de la transmission et la gestion de l’infection.,

grâce au test simultané de la présence d’antigène et d’anticorps du VIH, Le DUO Ultra offrira non seulement une initiation et une efficacité accrues du traitement et une réduction du risque de transmission, mais offre plusieurs avantages par rapport aux tests d’anticorps et d’antigène conventionnels. Il diminue d’au moins 50% le temps nécessaire pour effectuer à la fois des tests d’anticorps et d’antigène, car le DUO Ultra accomplira les deux tests simultanément dans une période comparable à celle nécessaire pour réaliser l’un des tests indépendamment. Le DUO Ultra est un système efficace et automatisé; c’est-à-dire,, après avoir introduit le sérum ou le plasma dans le puits d’échantillon de la bande de réactif et entré l’identification dans le programme informatique, l’instrument fonctionnera indépendamment pour accomplir l’essai de jusqu’à 30 échantillons dans 2.5 h en l’absence d’autres mains-sur le temps ou la supervision. Ainsi, le temps pratique pour le technicien est d’environ 20 à 30 min Par 30 tests pour détecter à la fois l’antigène et l’anticorps., Troisièmement, il offre une flexibilité parce que n’importe quel nombre d’échantillons (1 à 28 avec deux contrôles) peut être testé sans gaspillage de réactifs ou de puits de bande et parce que les échantillons peuvent être testés pendant la nuit sans surveillance. Trois séries d’essais peuvent facilement être effectuées par jour, chacune comprenant 30 échantillons pour un total de 90 échantillons par jour. Bien que le fabricant n’ait pas indiqué de prix, il est raisonnable de supposer que le prix du DUO Ultra sera compétitif par rapport au prix collectif des tests d’anticorps et d’antigènes.,

Les tests de dépistage du VIH ont évolué au cours de la dernière décennie pour produire des tests qui possèdent de nouvelles caractéristiques et qui peuvent résoudre les problèmes de diagnostic qui subsistent, par exemple, la détection d’une infection précoce, les résultats indéterminés, l’infection chez le nouveau-né, le besoin de résultats rapides, etc. La disponibilité d’un test de quatrième génération capable d’offrir une augmentation de la sensibilité par rapport aux autres tests d’anticorps est une autre étape de l’évolution., Le concept de détection simultanée d’antigènes et d’anticorps est d’une grande importance, car il est absolument nécessaire de poursuivre les tests de dépistage précoce de l’infection et d’appliquer des stratégies d’économie. Cette étude, ainsi que les études d’autres, a vérifié que ce type de stratégie de test est précis et efficace et offre un certain nombre d’avantages par rapport aux générations précédentes d’anticorps et d’antigènes Elisa.