los eventos de Exonización ocurren en intrones enriquecidos con nuevos transposones
para investigar el potencial de que ocurran nuevos eventos de exonización dentro del transcriptoma humano, analizamos más de 400 conjuntos de datos ARN-seq de Fig. 1a y la sección «Métodos»)., Solo consideramos que las lecturas se asignan a uniones exón-exón (EEJs) compatibles con al menos 5 lecturas y un valor de porcentaje empalmado (PSI) de al menos 5%. Se definieron exones nuevos como aquellos ausentes de las bases de datos de anotación y de todos los conjuntos de datos de control no perturbados (Fig. 1a). Confirmando la validez de este enfoque, la caída de la proteína de unión al ARN (RBP) ribonucleoproteína C heterogénea (hnRNPC) creó los eventos de exonización más derivados del Alu (archivo adicional 1: Figura S1), en línea con las observaciones anteriores . En total, detectamos 13,103 nuevos eventos exónicos dentro de 4774 genes o 30.,6% de los genes codificadores de proteínas humanas evaluados bajo las perturbaciones que encuestamos.
la Genómica características de los intrones con exonization eventos. un flujo de trabajo para identificar nuevos eventos de exonización (consulte la sección «Métodos»). Brevemente, el ARN-seq de shRNA knockdown de las proteínas de unión al ARN en HepG2 es analizado por 2-pass enabled STAR, y luego se incorporan nuevas uniones en archivos de índice analizados por Whippet ., Los exones identificados se filtran para eliminar las uniones exón-exón y los eventos que ocurren en cualquiera de las muestras de control coincidentes, así como anotados en las bases de datos del genoma. Solo se incluyen los eventos soportados por > 5 Lee mapeo sobre uniones exón-exón y un porcentaje empalmado (PSI) superior al 5%. B gráfico que muestra los resultados de un análisis de regresión lineal logística dirigido a identificar características importantes en la discriminación de intrones propensos a eventos de exonización a todos los demás intrones expresados., Las características en negrita contribuyen significativamente al modelo (p < 0.01, prueba T de Student). TSS: sitio de inicio de la transcripción; ppt_len: longitud del tracto de polipirimidina; 5’ss, 5′-sitio de empalme; 3’ss, 3′-sitio de empalme; Bp_scr: puntuación de punto de ramificación; SS_dist: distancia del sitio de empalme; BP_NUM: número de punto de ramificación; AGEZ, longitud de la zona de exclusión de DINUCLEÓTIDOS AG; TAD: dominio de asociación topológica; ppt_scr: puntuación del tracto de polipirimidina (n = 13.103)., C gráfico que muestra los resultados de un análisis de regresión lineal logística dirigido a identificar el tipo de elementos transponibles que discriminan de manera más efectiva los intrones propensos a eventos de exonización en comparación con todos los demás intrones expresados. Las características en negrita contribuyen significativamente al modelo (p < 0.01, prueba T de Student). Los nodos están coloreados por la edad promedio estimada de cuando surgieron los elementos transponibles (n = 13,103)., d Mapa de enriquecimiento para las categorías funcionales GO, REACTOME y KEGG de genes que contienen eventos de Alu-exonización, con Términos representativos de GO mostrados para cada sub-red (Ver archivo adicional 1: Figura S1 para la versión anotada)., El tamaño del nodo es proporcional al número de genes asociados con la categoría GO, y el ancho del borde es proporcional al número de genes compartidos entre las categorías GO
para investigar los mecanismos subyacentes a estos eventos de exonización, cotejamos una lista de características asociadas clásicamente con el empalme alternativo, incluida la fuerza del sitio de empalme, el contenido de GC y la longitud del tracto de polipirimidina (archivo adicional 2: Tabla S1)., Luego se utilizó la regresión lineal logística para comparar estos eventos con un grupo» de fondo » de intrones expresados que carecían de evidencia de exonización (Fig. 1b). Validando nuestra elección de características genómicas, nuestro modelo alcanza una alta tasa media positiva real del 75,2% (archivo adicional 1: Figura S1). Además, se pudo confirmar resultados previos de que los eventos de exonización tienden a ocurrir en intrones largos con un alto contenido de GC (archivo adicional 1: Figura S1, longitud de intrón: p < 3.53 × 10-59, GC 1.01 × 10-73, prueba T de Student)., Notably, we find exonization events often overlap nucleosome-binding sites (Additional file 1: Figure S1, P < 2.37 × 10-23, Wilcoxon test), rarely occur at the 3-end of the gene body (p < 5.90 × 10-21, Student t test) and show a significant tendency to occur within 5-utrs (archivo adicional 1: figura S1, p < 7.13 × 10-166, prueba exacta de Fisher). Es importante destacar que también observamos que el predictor más fuerte para la exonización fue la aparición de elementos transponibles que se superponen al exón Nuevo (Fig., 1b y archivo adicional 1: Figura S1, p < 6.46 × 10-127, prueba T de Student). En comparación con estos predictores fuertes, ningún elemento de empalme cis-Regulador contribuye significativamente al modelo o muestra diferencias significativas entre los conjuntos de Datos (archivo adicional 1: Figura S1, p > 0.05, prueba T de Student).
para evaluar la conservación del nuevo uso de exones en todas las especies, analizamos el alcance de la exonización en múltiples tipos de tejidos emparejados dentro de cuatro especies de primates que abarcan 30 millones de años de evolución de primates., Para explorar el uso de exonización entre muestras, los genes con eventos que ocurren en las cuatro especies se identificaron y clasificaron utilizando clustering de propagación de afinidad. En línea con el empalme canónico alternativo, las muestras de la misma especie invariablemente se agruparon juntas (archivo adicional 1: Figura S2). La excepción notable a esta tendencia se observó en muestras de los testículos, que mostraron agrupamiento específico del tejido. Esto sugiere que dentro de los testículos hay una fuerte firma de exonización conservada a través de especies de primates en múltiples genes (archivo adicional 1: Figura S2).,
para investigar más a fondo la influencia de los retrotransposones en la exonización, subdividimos los elementos transponibles en sus subfamilias principales. En línea con la especificidad del linaje de los eventos de exonización, los contribuyentes más significativos al modelo son los transposones menores de 70 millones de años. En particular, los miembros de la subfamilia de elementos Alu AluJ y AluS, así como los elementos L1 altamente móviles son predictores fuertes (Fig. 1c). Curiosamente, una excepción a esta regla es la AluY sub-familia , que muestra un patrón que recuerda mucho mayores transposón eventos (Fig. 1c)., Esta diferencia se debe potencialmente a su depleción relativa dentro de los cuerpos genéticos (3%, 19%, AluY, AluS, ocurrencia en intrones expresados). Finalmente, quisimos evaluar qué tipo de genes contiene eventos de Alu-exonización. Curiosamente, encontramos un fuerte enriquecimiento para las funciones relacionadas con la señalización celular y la regulación del ciclo celular (Fig. 1d, archivo adicional 1: Figura S1 y archivo adicional 3: Tabla S2). Junto con ejemplos anteriores, nuestra observación de un extenso número de eventos de exonización que se superponen con nuevos transposones sugiere una nueva fuente de complejidad transcriptómica.,
las proteínas de unión al ARN m6a suprimen la exonización
una evaluación de los factores trans que promueven la exonización (archivo adicional 1: Figura S2 y archivo adicional 4: Tabla S3) reveló un enriquecimiento de los RBPs de unión a m6a (n6-metiladenosina), especialmente entre exones nuevos que contienen Alu (Fig. 2a, p < 0,05, prueba hipermétrica). Esto incluyó hnRNPC, que se ha demostrado previamente para inducir un gran número de eventos de exonización Alu-específicos, así como el síndrome de DiGeorge región crítica 8 (DGCR8) y YTH dominio que contiene la proteína 2 (YTHDC2)., Para examinar el papel potencial de las marcas m6a en la exonización, analizamos los datos de derribo de la subunidad de la enzima de modificación m6a n6-adenosina-metiltransferasa (METTL3) . Este análisis reveló un aumento significativo en el número de eventos de exonización detectables tras la caída de METTL3 (Fig. 2b, p < 3.57 × 10-03, Wilcox-rank Sum test), en concordancia m6a regulando la inclusión de nuevos exones. El análisis posterior de estos eventos de exonización dependientes de METTL3 reveló un enriquecimiento funcional de genes asociados con el daño del ADN (p < 2.,68 × 10-02, valor de P corregido por FDR). A continuación, analizamos datos de células HeLa que constituyen dos derribos de reguladores M6A conocidos (factor de empalme rico en Serina/arginina 3 (SRSF3) y proteína 1 que contiene dominio YTH (YTHDC1)) y dos derribos de RBPs no conocidos para reconocer directamente m6a (factor de empalme rico en Serina/arginina 9 y 10 (SRSF9 y SRSF10)) . De acuerdo con los resultados anteriores, encontramos que el derribo de SRSF3 o YTHDC2 induce fuertemente la exonización, mientras que la disminución de la expresión de SRSF9 o SRSF10 tiene poco o ningún impacto (archivo adicional 1: Figura S2).,
m6a metilación suprime exonization. a Barplots of M6A-methylation associated genes and the number of novel exons identified upon knockdown in HepG2 cells B Barplot showing number of exonization events induced upon knockdown of N6-adenosine-methyltransferase (METTL3) compared to a control sample. valor de p calculado usando la prueba de suma de Wilcoxon-rank. C cuadros que muestran picos intrónicos normalizados de M6A por nucleótido de ARN naciente en células HepG2., Los elementos de Alu en todo el gen se producen dentro de los intrones expresados sin eventos de exonización identificados. Las gráficas de caja muestran el rango intercuartílico como una caja sólida, 1,5 veces el rango intercuartílico como líneas finas verticales, la mediana como una línea horizontal y el intervalo de confianza alrededor de la mediana como una muesca. nt, nucleótido (n = 13,247). D gráfico que muestra la cobertura relativa de M6A en nucleótidos que rodean elementos de Alu. Véase c para la descripción de «genome-wide»., (n = 13,247)
para evaluar más a fondo si la modificación de m6a afecta a los eventos de exonización, evaluamos el enriquecimiento de los sitios m6a dentro de secuencias exoneradas . En este abordaje se utilizó BrU-seq seguido de aislamiento de fragmentos metilados de m6a utilizando un anticuerpo específico de m6a . Debido a la naturaleza repetitiva de los elementos Alu, utilizamos la maximización de expectativas para asignar lecturas multimapping (máximo de 10 coincidencias permitidas) a los elementos Alu basados en la expresión del gen del huésped ., Como conjunto de comparación, examinamos todos los elementos Alu dentro de regiones intrónicas expresadas que no están en la vecindad de un exón nuevo (ver la sección «Métodos»). Este análisis reveló un fuerte enriquecimiento del mapeo de sitios m6a a elementos Alu exonizados (Fig. 2c, p < 3.23 × 10-123, prueba de Wilcoxon rank-sum; Fig. 2d, p < 2.13 × 10-63, prueba de suma de rangos de Wilcoxon; archivo adicional 1: Figura S2). En conjunto, esto sugiere que la modificación de m6a y las proteínas de unión son reguladores clave de los eventos de exonización (que contienen Alu).,
mecanismos que aumentan la «ventana de oportunidad» para el reclutamiento de spliceosomas promueven la exonización
nuestro análisis inicial reveló que la predicción de exonización está fuertemente mejorada por elementos repetidos, longitud de intrón y contenido de GC. Se sabe que estas características se correlacionan negativamente con la tasa de elongación de la ARN polimerasa II (RNAPII). Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que los cambios en la tasa de elongación de RNAPII pueden promover la exonización., Para probar esto, analizamos los datos de RNA-seq de células humanas que expresan mutaciones que aumentan (E1126G) o disminuyen (R749H) la tasa de elongación de la ARN polimerasa II (RNAPII) . Para determinar la tasa de elongación para cada mutante, analizamos los datos del ensayo de secuenciación nuclear de ejecución en todo el genoma (GRO-seq) combinado con el inhibidor de elongación de transcripción DRB (consulte la sección «Métodos» y ). Observamos que las mutaciones que ralentizan la tasa de elongación de RNAPII (R749H) inducen eventos de exonización fuertemente (Fig. 3a, todos: p < 3.,18 × 10−45, Fisher’s exact test), with this change especially strong in Alu-containing novel exons (Fig. 3a, ALU: p < 5.62 × 10−53, Fisher’s exact test). In contrast, mutations that speed up elongation had negligible effects on the number of exonization events detected (Fig. 3a; p > 0.05, Fisher’s exact test).
Reduced rate of RNA polymerase II elongation and poor splicing efficiency promotes exonization., una gráfica de puntos que muestra el impacto de las mutaciones de la ARN polimerasa en la exonización de exones que contienen Alu. WT, wildtype; rápida, mutación e1126g; lenta, mutación R749H. Cada punto representa un conjunto de datos individual. KB, kilobase; min, minutos. Alargamiento, tasa de alargamiento transcripcional (véase la sección «Métodos» y ). B diagrama de caja de la eficiencia de empalme para intrones con eventos de exonización frente a todos los intrones expresados sin evidencia de exonización. La eficiencia del empalme es una métrica que describe la velocidad de escisión intrónica medida mediante la evaluación del ARN-seq naciente utilizando BRU-chase A 0, 15, 30 y 60 min. Véase La Fig., 2d para la descripción de boxplots. *** p < 1 × 10-10 valor de p calculado usando la prueba de suma de Wilcoxon-rank. (n = 4.011). C gráfico de barras apiladas que muestra las distribuciones de intrones para la eficiencia de empalme identificadas por BrU-chase. Grupos asignados por k-means clustering (k = 5) (vea la sección «Métodos»)—vea el archivo adicional 1: Figura S3a para distribuciones de eficiencias de empalme., (n = 83,972)
Este resultado apoya el modelo de competencia de empalme alternativo en el que la regulación de la inclusión de exones se asocia a una «ventana de oportunidad» para el reconocimiento del empalme. Si esta conexión entre la exonización y la oportunidad es válida, un mecanismo independiente para la aparición de nuevos exones debería ocurrir dentro de los intrones que son procesados lentamente por la maquinaria de empalme., Para evaluar esta hipótesis, analizamos los datos de ARN nacientes de BrU-Chase-seq, en el que las células se etiquetan con un pulso de BrU de 15 minutos y se persiguen durante 0, 15, 30 y 60 minutos. Para determinar la cinética de empalme para cada intrón, calculamos la dinámica de eficiencia de empalme (SEDs) o la tasa de escisión de intrón (consulte la sección «Métodos»). El agrupamiento de K-means se utilizó entonces para identificar cinco grupos de intrones con SEDs que iban de muy rápido a muy lento (archivo adicional 1: Figura S3). Los intrones que contenían eventos de exonización se compararon con un conjunto de antecedentes de todos los intrones expresados., Sorprendentemente, este análisis revela que los intrones que contienen eventos de exonización están fuertemente enriquecidos dentro del cúmulo SED más lento (Fig. 3b, p < 3.23 × 10-239, prueba de suma de rango de Wilcox, y archivo adicional 1: Figura S3). Además, estos intrones muestran una reducción muy significativa en el SED en comparación con los grupos de fondo (Fig. 3C y archivo adicional 1: Figura S3, p < 2.2 × 10-160, prueba de suma de Rango de Wilcoxon)., En conjunto, estas observaciones sugieren que los mecanismos que amplían la «ventana de oportunidad» aumentarán la probabilidad de reconocimiento por parte del mecanismo de empalme y, por lo tanto, promoverán la tasa de exonización.
el daño del ADN induce la exonización dentro de los genes del ciclo celular
El proceso exógeno también puede promover alteraciones en la elongación de la transcripción y, por lo tanto, puede alterar las tasas de exonización., Para investigar esto nos centramos en la irradiación UV, ya que estudios Anteriores han demostrado que promueve tanto la hiperfosforilación de RNAPII que conduce a la inhibición posterior de la elongación de la transcripción y el reclutamiento de la maquinaria m6a a sitios de daño del ADN . Utilizando datos obtenidos del naciente RNA-seq (protocolo GRO-SEQ), evaluamos el impacto de la irradiación UV en la ALU-exonización durante un período de 24 horas . Sorprendentemente, después de la pronunciada disminución en la tasa de elongación de RNAPII tras la irradiación UV, encontramos un aumento igualmente sorprendente en la tasa de exonización (Fig., 4A y archivo adicional 1: Figura S4). Esta incorporación de nuevos exones continúa aumentando mientras la tasa de elongación de RNAPII permanezca baja. Es importante destacar que la recuperación completa de la tasa de elongación de RNAPII en la marca de 24 horas está acompañada por una caída precipitada en el número de eventos de exonización detectables (Fig. 4A y archivo adicional 1: Figura S4).
la irradiación UV aumenta el número de exonización dentro de los genes del ciclo celular promoviendo la retención de transcripción en el núcleo., una gráfica lineal que muestra los resultados del análisis GRO-seq después de la irradiación UV (ultravioleta). La línea punteada representa la estimación basada en los datos del documento original . Ver los datos originales en el archivo adicional 1: Figura S4. La región sombreada amarilla representa la aplicación UV (n = 3.278). B gráfico de distribución acumulativa del cambio en la expresión de genes dentro de la fracción de polisoma en comparación con la fracción de células enteras. Un gráfico de distribución acumulativa describe la proporción de datos (eje y) menor o igual a un valor especificado (eje x). Distribución acumulativa F (x), función de distribución acumulativa., valor de p calculado usando la prueba de suma de Wilcoxon-rank. C cuadros que muestran cambios normalizados (cambio en TPM/max (TPM)) en la diferencia de expresión entre el ARN-seq total y el ARN-seq comprometido ribosómico después de la irradiación UV. Los Genes se agrupan en Porcentaje empalmado en (PSI) aumento del exón Nuevo exonerado después de la irradiación UV. Tamaño de la muestra del contenedor de izquierda a derecha: n = 427, 158, 355, 410 y 438. Véase La Fig. 2d para la descripción de boxplots. Valores de P calculados usando la prueba de suma de Wilcoxon-rank. TPM, transcripciones por millón., D categorías funcionales de genes que se someten a exonización tras la irradiación UV en comparación con el conjunto de datos de control (Véase también el archivo adicional 1: Figura S4). FDR , false discovery rate
dados los hallazgos previos de que las secuencias que contienen Alu pueden promover la retención nuclear, investigamos si tras la irradiación UV el compromiso del polisoma de los genes se vio afectado por la exonización ., Notablemente, después de la irradiación UV, identificamos una disminución significativa en los niveles de expresión de genes que contienen eventos de exonización que contienen Alu dentro de la fracción de polisoma, en comparación con la expresión de ARN-seq de célula completa (Fig. 4b, p < 8.50 × 10-22, Wilcoxon rank-sum test). Además, la fuerza mediana de este agotamiento aumenta con el porcentaje de inclusión de los exones nuevos (Fig. 4c, p < 1.49 × 10-06, Wilcox rank-sum test).,
a continuación nos interesó investigar el tipo de genes en los que se promueven eventos de exonización después de la irradiación UV. Curiosamente, hay un fuerte enriquecimiento para los genes involucrados en la regulación del ciclo celular y la unión al ARN (Fig. 4D y archivo adicional 1: Figura S4). En conjunto, estos resultados sugieren que el daño del ADN regula a la baja el compromiso ribosomal de los genes del ciclo celular parcialmente a través de la promoción de eventos de exonización que contienen elementos de Alu, que se sabe que inducen la retención nuclear ., Por último, se investigó si se trataba de un mecanismo evolutivamente conservado mediante la evaluación de las tasas de exonización tras la irradiación UV en fibroblastos embrionarios de ratón. Notablemente, identificamos un claro aumento en los eventos de exonización en muestras tratadas con UV versus no tratadas con la inclusión de repeticiones B específicas de roedores particularmente afectadas (archivo adicional 1: Figura S4). El análisis funcional de los genes que contienen exones nuevos reveló una vez más un fuerte enriquecimiento para los genes del ciclo celular (archivo adicional 1: Figura S4).,
la Exonización está agotada en los cánceres hematológicos
El Empalme aberrante es un sello distintivo del cáncer y contribuye a numerosos aspectos de la biología tumoral . Los cambios relacionados con el cáncer en el empalme se han relacionado con la expresión alterada de los PRB, algunos de los cuales son oncogénicos o actúan como supresores tumorales . A pesar de la amplia evidencia de empalmes alterados en el cáncer, no se ha explorado el grado en que estos cambios afectan la exonización., Por lo tanto, evaluamos la ocurrencia de exonización a través de muestras de tumor y control compatibles de pacientes dentro de una variedad de cánceres diferentes (archivo adicional 5: Tabla S4). Sorprendentemente, este análisis reveló una supresión significativa y reproducible de la exonización en muestras de pacientes con leucemia linfocítica crónica (LLC) y síndromes mielodisplásicos (SMD) (Fig. 5A, CLL: p < 2.14 × 10-04; MDS: p <1.15 × 10-04; AML: p < 4.,02 × 10-09; prueba de Wilcoxon rank-sum), que fue independiente de los cambios de expresión (archivo adicional 1: Figura S5). Además, esta supresión de la exonización es específica de las neoplasias hematológicas (Fig. 5b, p < 2.93 × 10-09, prueba de suma de Rango de Wilcoxon). De acuerdo con nuestras observaciones anteriores, la inclusión de exones nuevos se suprime dentro de los genes asociados con el ciclo celular y el procesamiento de ARNm (archivo adicional 1: Figura S5 y archivo adicional 6: Tabla S5, p < 1 × 10-5, FDR corregido, comparado con muestras de control).,
Hematologic cancers display decreased exonization. a Boxplots displaying percentage change in Alu-exonized events compared to matched patient controls. Dots represent data from individual samples. See Fig. 2c for the description of boxplots. SCLC, small cell lung cancer; MDS, myelodysplastic syndromes; CLL, chronic lymphocytic leukemia; AML, acute myeloid leukemia. b Boxplots showing data from a collated into two major cancer types. See Fig., 2c para la descripción de las gráficas de caja. C cuadros gráficos que muestran cambios en la exonización de Alu en relación con muestras de control compatibles en líneas celulares que expresan proteínas de unión al ARN con mutaciones cancerosas conocidas. Véase La Fig. 2c para la descripción de las gráficas de caja. D gráfico de puntos que muestra los cambios en la exonización de Alu de muestras de SMD agrupadas por genes que contienen mutaciones. Cada punto representa los datos de un estudio individual. e gráfico de puntos que muestra el número de eventos exonizados en muestras de líneas celulares SET2 y muestras de pacientes antes y después de la administración del inhibidor de bromodominio ARV-825., También se incluyen muestras de control sanas independientes del mismo tipo de célula (CD34+). ARV-825, inhibidor de BRD4
estudios recientes de secuenciación de todo el genoma de muestras de pacientes con síndromes mielodisplásicos han revelado mutaciones somáticas frecuentes en un grupo clave de proteínas asociadas a spliceosomas, incluyendo el factor de empalme 2 rico en Serina/arginina (SRSF2) y el factor de empalme U2AF 35 subunidad KDA.
(U2AF1). Estas mutaciones resultan en el empalme incorrecto de cientos de transcripciones ., Dado el trabajo previo que vincula la regulación de U2AF1 y los eventos de exonización , exploramos si estos tipos de mutaciones pueden ayudar a explicar la supresión de exonización observada en los datos de los pacientes. Para investigar esta posibilidad, analizamos los datos GRO-seq de una línea celular HEK-293 que expresaba factores de empalme de tipo salvaje (SRSF2 o U2AF1) o mutante con (SRSF2(P95H), U2AF1(Q157P)) y sin (U2AF1(S34F)) ganancia de mutaciones de función de empalme . Este análisis reveló que tanto la mutación P95H dentro de SRSF2 como la mutación Q157P dentro de U2AF1 inhibieron la tasa de inclusión de exones nuevos (Fig., 5c, p < 1.46 × 10-03, prueba de suma de rango Wilcox, en comparación con los controles), mientras que el S34F en U2AF1 tuvo poco efecto. Para investigar si estos cambios reflejan la carga mutacional de las muestras de pacientes con SMD, agrupamos estos datos en función de las mutaciones genómicas dentro de sus RBPs. De acuerdo con los datos de la línea celular, este análisis reveló una estratificación de exonización basada en el tipo de mutación genómica de la RBP (Fig. 5D y archivo adicional 1: Figura S5).,
para investigar si esta supresión de la exonización en cAML podría aliviarse disminuyendo la tasa de elongación transcripcional, evaluamos el impacto del fármaco ARV–825, que se sabe que inhibe la elongación RNAPII al promover la degradación de la proteína 4 que contiene Bromodominio (BRD4) . El análisis de muestras de pacientes con cAML replicó nuestros resultados previos mostrando supresión de la exonización (Fig. 5e). Es importante destacar que esta supresión se invierte tras la aplicación de inhibidores de BRD4 con un aumento de 12 veces en el número de eventos de exonización detectados (Fig., 5e, p < 4,86 × 10-91, prueba hipergeométrica). En conjunto, esto sugiere que en los cánceres de sangre los eventos de exonización dentro de los genes del ciclo celular se suprimen, pero pueden revertirse fuertemente por la intervención farmacológica que aumenta la «ventana de oportunidad».
